人高迁移率族蛋白B1细胞内定位及移位研究

      目的  观察人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在真核细胞内的定位和移位情况.

      方法  构建人HMGB1及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的哺乳动物细胞表达载体.通过两步亚克隆的方法,将HMGB1和EGFP的编码序列以融合表达形式克隆到带有血凝素(hytohemagglutinin,HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染293A细胞,在荧光显微镜下观察结果.

      结果  重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定证明构建正确,并在293A细胞中得到大量表达.荧光显微镜观察发现,融合蛋白主要分布于细胞核中,经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后18 h,部分细胞中融合蛋白从胞核移位到胞质,与预期结果一致.

      结论  HMGB1的绿色荧光蛋白融合表达载体构建成功.该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具.

      引用格式   徐佳，刘志锋，王娟，等. 人高迁移率族蛋白B1细胞内定位及移位研究.中国危重病急救医学，2006，18（6）：338-341.

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